产品名称：YF® 594 SE（YF® 594 琥珀酰亚胺酯）

产品规格：1mg

储存条件：-20℃避光保存，有效期见外包装

产品介绍：
YF® SE (or NHS ester)是我司生产的具有氨基反应活性的一类荧光染料。该类染料的SE基团可以与氨基基团反应生产稳定的酰胺键。相比于市面上其他同类染料，YF®是稳定性更强、水溶性更好、荧光强度更优的新一代荧光染料。
我司还提供小批量抗体标记试剂盒Super-n-stain® Antibody Labeling Kits，可在30 min内标记5-100 μg抗体，而无需纯化步骤，简单方便。

标记方法和步骤：

（1）准备标记抗体用 0.1 M 的 NaHCO3溶液（pH~8.3）稀释抗体，使抗体终浓度为 2.5 mg/mL。如果产品预先用磷酸盐缓冲液稀释，如 PBS 缓冲液（不含胺基类化合物），那么可以直接在该缓冲液中加入约 1/10 体积 1M 的 NaHCO3 母液，使 NaHCO3 终浓度为 0.1 M。注：蛋白浓度为 2.5 mg/mL 时，标记效率大概为 35%，蛋白浓度低于 2.5 mg/mL 也可用于标记，但标记效率会降低。当蛋白浓度高于 5 mg/mL 时，标记效率可能更高。由于缓冲液和蛋白纯度存在差异性，因而更 的标记效率由实操条件决定。如果蛋白浓度过低，可以通过超滤法进行浓缩。

（2）准备染料储存液室温预热一管 1 μmole 的 YF® SE，在管中加入 0.1 mL 的无水 DMSO，充分涡旋溶解染料，配制浓度为 10 mM 的染料储存液。如果使用更微量的蛋白进行标记反应，那么染料需要稀释至更低浓度。注：a. 剩余的染料储存液应于-20℃低温存放，以备后续使用。如果使用无水 DMSO 配制染料储存液，那么染料至少可以保存一个月。 b. 染料也可以用去离子水配制，但是由于染料在水中会缓慢水解，所以水配制的储液 现配现用。

（3）标记反应步骤 a. 搅拌或涡旋混匀蛋白溶液，逐步滴加 15-25 μL 的染料储存液（10 mM），使染料/蛋白的摩尔比在 9: 1 至 15: 1 的范围内。 YF® SE 标记 IgG 抗体的 DOL（结合于每个蛋白分子上的染料数量）范围请参考上表。 b. 在室温下搅拌反应 1 h，微量标记时也可在摇床上振荡孵育 1 h。注：在进行结合反应的同时，进行步骤 2(4)，平衡葡聚糖凝胶 G-25 透析柱。

（4）从反应液中分离标记蛋白 a. 用 PBS 缓冲液（pH~7.4）平衡葡聚糖凝胶 G-25 透析柱（10 mm×300 mm）。 b. 将步骤 3(b)反应溶液加入柱子，并用 1×PBS 缓冲液洗脱。首先洗脱出来的着色带是染料-蛋白结合物。注：a. 对于小规模的标记反应，为了避免过度稀释产物，可以使用超滤装置去除结合物中的自由染料。 b. 当结合反应完成后，如不及时分离染料-蛋白结合物，可以加入 50 μL 1M 赖氨酸终止反应。多数情况下，不需要此操作，因为剩余的未反应的染料在反应 已经被充分水解。

注意事项
1. 标记的蛋白如需长期储存，推荐加入5-10 mg/mL BSA和0.01-0.03% NaN3，以防止蛋白变性和微生物滋生。放置于4℃避光保存。若加入了终浓度为50%的甘油，可放-20℃保存。可稳定保存一年以上。
2. 操作过程注意避光，搅拌速度应适当以避免产生气泡。
3. 层析柱装柱时，尽量使柱体均匀，柱面平整，无气泡、裂隙。
4. 上样时注意，当柱顶缓冲液与凝胶平面相切时再加样品，洗脱时，当样品走至与凝胶平面相切时再加洗脱液。
5. 影响标记效率的其他因素还包括：温度、反应时间、pH、荧光染料与蛋白的量等，需注意控制。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。