产品名称：RIPA 裂解液（强，无抑制剂）

产品规格：100 mL

储存条件：4℃保存，有效期见外包装

产品介绍：

RIPA 裂解液（强，无抑制剂）可用于裂解细胞/组织，有效提取细胞质、细胞膜及细胞核蛋白，获得的蛋白样品可用于常规的蛋白分析，如 Western Blot、IP 等。本产品的主要成分为 100 mM Tris-HCL（pH 8.0）、150 mM NaCl、1% Triton X-100、1% deoxycholic acid、0.1% SDS 等。 公司供的另外一款 Western 及 IP 细胞裂解液，其有效裂解成分为 1% NP-40。相较于 RIPA 裂解液（强，无抑制剂），其裂解能力相对较弱，但能够满足一般用户需求。遇到某些难溶解蛋白的 Western，若发现 Western 及 IP 细胞裂解液效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的 RIPA 裂解液（强，无抑制剂）。以贴壁细胞（6 孔板）举例，每孔 200 μL RIPA 裂解液，100 mL 试剂大概可以用于 500 个孔。

实验步骤：

1. 取适当量的RIPA裂解液，在使用前数分钟根据需要加入蛋白酶或磷酸酶抑制剂，并在冰上预冷。注：蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂需另行购买，  公司可提供蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂。

2. 裂解细胞（在冰上操作）（1）对于细胞样品：贴壁细胞： a. 去除培养基，用预冷的 1× PBS 清洗 2 遍。 b. 去上清，加入 200 μL 预冷后的 RIPA 裂解液（6 孔板），混匀，冰浴 5 min。 c. 充分裂解后，收集裂解液。 d. 14000×g 离心 5 min，取上清用于进一步实验。悬浮细胞： a. 收集细胞，1500 rpm 离心 3 min。 b. 去上清，并用预冷的 1× PBS 清洗，1500 rpm 离心 3 min，重复 2 遍。 c. 去上清，加入 200 μL 预冷后的 RIPA 裂解液（1 × 106 cells/管），混匀，冰浴 5 min。 d. 充分裂解后，14000×g 离心 5 min，取上清用于进一步实验。（2）对于组织样品： a. 将组织剪成小块，并称重。 b. 加入200 μL预冷后的RIPA裂解液（20 mg组织），用匀浆器进行匀浆。 c. 冰浴5 min，充分裂解细胞。

d. 14000×g离心5 min，取上清用于进一步实验。

注意事项：

1. RIPA裂解液（强，无抑制剂）含有较高浓度的去垢剂，因此与Bradford法测定蛋白浓度不兼容，如需测定蛋白浓度可选本公司生产的BCA蛋白定量检测试剂盒。

2. RIPA裂解液（强，无抑制剂）不含有蛋白酶或其他酶的抑制剂，使用前请根据实验需求加入酶抑制剂，以防蛋白降解。

3. 裂解过程需在冰上进行。

4. 以Hela细胞为例，1 × 106 cells需要200 μL预冷的RIPA裂解液，该裂解液的量相对较充足，在有限细胞的情况下，如需提高蛋白浓度，可适当减少裂解液的量。

5. 裂解产物中如若出现的一小团透明胶状物，属于正常现象，是含有基因组DNA的复合物。