产品名称：Western 及 IP细胞裂解液

产品规格：100 mL

储存条件：4℃保存，有效期见外包装

产品介绍：Western及IP细胞裂解液（Cell Lysis Buffer for Western and IP），是一种在非变性条件下裂解细胞或组织样品的裂解液，主要成分为25mM Tris-HCl (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40和5% glycerol等，可有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
本裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀（Immunol precipitation，IP）、免疫共沉淀（Co-IP），以及许多兼容1% NP-40的酶活性或者生物小分子的检测。
UElandy提供的另外一款RIPA裂解液（强，无抑制剂），其有效裂解成分为1% Triton X-100、1% deoxycholic acid、0.1% SDS ，裂解蛋白能力更强。如遇某些难溶解蛋白的Western，发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的RIPA裂解液（强，无抑制剂）。

使用方法：

1. 取适当量的 Western 及 IP 细胞裂解液，在使用前数分钟根据需要加入蛋白酶或磷酸酶抑制剂。注意：蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂需另行购买，UElandy 可提供蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂。

2. 样本裂解（需在冰上操作）：对于贴壁细胞： a. 去除培养基，用 PBS（生理盐水或无血清培养液）清洗一遍。 b. 尽量去除 PBS，按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 μL 裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常动物细胞 1-2 秒后就会被裂解。对于悬浮细胞： a. 离心收集细胞。 b. 按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 μL 裂解液的比例加入裂解液，轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。对于组织样品： a. 把组织剪切成细小的碎片。 b. 按照每 20 mg 组织加入 150-250 μL 裂解液的比例加入裂解液。

注意：如果裂解不充分，可以适当增加裂解液的用量；如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。 c. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。注意：若组织样品非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使其裂解充分。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

3. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。得到的蛋白样品可分装保存于-20℃，长期保存于-80℃。

注意事项：

1. 裂解时需在冰上或 4℃进行。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本产品 科研使用。