产品名称：PicoGreenTM 核酸荧光染料

产品规格：1mL

储存条件：4℃避光保存，有效期见外包装。使用时应避免反复冻融，建议分装成小管冻存。

产品参数：Ex/Em：480/520 nm（结合 dsDNA）

产品介绍：

PicoGreen是荧光检测dsDNA并进行定量的一种产品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术：cDNA文库的构建、亚克隆的DNA片段纯化及应用，比如进行DNA定量、产物扩增和引物的进一步检测。常规的DNA含量的检测方法是在260 nm处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和RNA，而且这种方法不灵敏（5 μg/mL dsDNA溶液A260=0.1）。PicoGreen定量检测方法简单、方便，成为生物制品残留DNA检测的标准。
PicoGreen只有与dsDNA结合后才发出荧光，并且所发荧光强度与DNA浓度成正比。PicoGreen可以检测出25 pg/mL-1000 ng/mL范围内的dsDNA，且线性关系较好(R2>0.99)。
对于终体积为200 μL的检测体系，0.1 mL规格可检测200个样本，1 mL规格可检测2000个样本。

使用方法：

试剂制备 PicoGreen dsDNA定量试剂是以1 mL的浓缩液形式保存在无水的DMSO（二甲基亚砜）中。实验时，配制2×PicoGreen工作液：将浓缩液用1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按1:200的比例稀释。对于终体积为200 μL的检测体系，如需准备足够20个样品测定的工作液，可在1.99 mL 1×TE中加入10 μL PicoGreen；对于终体积为2 mL的检测体系，如需准备足够20个样品测定的工作液，则需要在19.9 mL 1×TE中加入100 μL PicoGreen浓缩液。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。PicoGreen见光易降解，因此要注意避光保存。溶液 在配制好数小时内使用，以保证 结果。

实验方法：

1. 标准品工作液的配制： Sigma小牛胸腺DNA干粉1 mg（Tris，NaCl等浓度已成标准体系），加入1 mL双蒸水，配制成1 mg/mL的标准液。 

2. 染料工作液的配置：5 μL PicoGreen加入0.995 mL TE（注意：用1×TE将PicoGreen稀释200倍，现用现配，注意避光）。 

3. 标准液稀释：（1）母液稀释：取10 μL（1 mg/mL）标准液加入到990 μL TE溶液中，稀释成10 μg/mL，取10 μL（10 μg/mL）标准液加入到 990 μL TE 溶液中，稀释成100 ng/mL。（2）倍比稀释：取800 μL（100 ng/mL）的标准液加入到200 μL TE溶液中，浓度为80 ng/mL，取500 μL（80 ng/mL）的标准液加入到500 μL TE溶液中，稀释到40 ng/mL；依次倍比稀释，配成20 ng/mL、10 ng/mL、5.0 ng/mL、2.5 ng/mL。 

4. 标准曲线的制备：倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100 μL混匀，避光室温放置5 min。使用FB-15型便携式荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，注意不要在样品中引入气泡，轻弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为空白对照，测定样品和空白对照的荧光值；或者直接用96孔板进行荧光检测，激发波长480 nm，发射波长520 nm，用标准品溶液的浓度（ng/mL）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。 

5. 测量待测样品的荧光值。根据制作的DNA浓度的标准曲线，计算待测样品浓度。

注意事项：

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。 

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 

3. PicoGreen工作液 现配现用，以保证 结果。 

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。