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产地 | 国产/进口 |
品牌 | YLKbio |
货号 | YLK-U0094 |
用途 | 科研&钙离子测定试剂 |
包装规格 | 50 μL |
是否进口 | 否 |
产品名称:Fluo-3, AM ester(钙离子荧光探针, 2mM)
产品规格:50 μL
储存条件:-20℃ 干燥避光保存,有效期见外包装。
产品参数:
Ex/Em:506/526 nm(结合 Ca 2+后)
CAS 号:121714-22-5
分子式:C51H50Cl2N2O23
分子量:1129.9
分子结构图:
产品介绍:Fluo-3, AM ester 是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。 Fluo-3, AM ester 进入细胞后可以被细胞内源性酯酶剪切形成 Fluo-3,从而被滞留在细胞内。Fluo-3 可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光。
使用方法:
1. 将溶液形式的Fluo-3, AM ester储液取出于室温回温。
2. 用PBS或HBSS等缓冲液稀释Fluo-3, AM ester储液,制备 4 μM的Fluo-3, AM ester工作液。注:为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上使用 探针浓度。
3.(可选)如果Fluo-3, AM ester进入细胞的效果不好,可向 Fluo-3, AM ester溶液中加入适量20 % Pluronic F-127溶液,防止Fluo-3, AM ester在缓冲液中聚集并促进Fluo-3, AM ester 进入细胞,Pluronic F-127终浓度控制在0.04-0.05 %。注:(1)20 % (w/v) 的Pluronic F-127 DMSO母液配制:100 mg Pluronic F-127中加入0.5 mL DMSO,配制成20 % (w/v)的 DMSO母液。溶解需要在40-50℃加热20-30 min。溶解后室温保存,勿冷藏。如果有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。(2)Pluronic F-127可降低Fluo-3, AM ester的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议将其加入储液中。
4. 取出预培养的细胞,除去培养基,使用PBS或HBSS溶液洗涤细胞3次。
5. 去除缓冲液,将Fluo-3, AM ester工作液加入细胞中,37℃ 培养10-60 min。注:如果 实验不能确定孵育温度和时间,建议尝试37℃ 孵育20 min,观察荧光效果。若细胞死亡较多,则适当缩短时间或降低温度;如果荧光强度太弱,则适当延长时间。
6. 去除Fluo-3, AM ester工作液,用PBS或HBSS等缓冲液洗涤细胞3次,然后用PBS或HBSS等缓冲液重悬细胞,制成 1×105 cells/mL的细胞悬液。
7. 37℃培养10 min,确保AM ester体在细胞内的完全去酯化作用。
8. 进行荧光钙离子检测。
注意事项:
1. 如果使用含有血清的培养基,血清中的酯酶会分解AM ester体,从而降低Fluo-3, AM ester进入细胞的效果。另外,含有酚红的培养基会使本底值略微偏高,加工作液前应尽量去除残留培养基。
2. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
3. Fluo-3, AM ester容易吸潮,从冰箱取出后,请确认在干燥的环境放至室温后开封。由于试剂极微量,开封前请将其短暂离心,以保证粉末落入管底。
4. Fluo-3, AM ester 遇水极易分解,如果不能一次用完,建议将储液小量分装保存。
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