产品名称：Hoechst 33258 活细胞 DNA 染料

产品规格：10 mg

储存条件：-20℃避光保存，有效期见外包装。

产品介绍：Hoechst 33258，也称bis Benzimide H 33258或HOE 33258，是一种非嵌入性的亮蓝色荧光染料。染料在溶液中荧光较弱，它们在活细胞中DNA聚AT序列富集区域的小沟处与DNA结合后荧光变得明亮，故此类染料也被称为DNA探针。因背景较低，故染色细胞不需洗涤步骤，且染色非常稳定，对活细胞无毒，结合DNA染色后可持续几天或更长时间。Hoechst 33258与Hoechst 33342相比在水中的溶解度要高，但两种染料均具有高细胞膜渗透性，被广泛用于细胞凋亡检测，染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
以贴壁细胞（96孔板）举例，每孔100 μL染色工作液，染色工作液浓度5 μg/mL计算，10 mg配置为工作液大概可以用于20000个孔的染色。

产品参数：

外观：白色/黄色/淡黄色固体
Ex/Em（结合DNA）= 352/461 nm
Ex/Em（未结合DNA）= 346/460 nm
CAS号：23491-45-4
分子式：C25H24N6O ? 3HCl
分子量：533.9
分子结构图：

实验步骤:

1. 工作液配置（1）向 EP 管中加入 1 mL ddH2O 配置 10 mg/mL 储液。（2）用 PBS 按照 1 : 2000 稀释 Hoechst 33258 储液至终浓度为 5 μg/mL 的工作液。

2. 染色（1）对于固定的细胞或组织 a. 对于细胞或组织样品，固定后适当洗涤去除固定剂。如需免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33258 染色。 b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258 工作液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待测染色样品体积 3 倍的染色液，混匀。室温放置 3-5 min。 c. 吸除 Hoechst 33258 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次，每次 3-5 min。注：清洗步骤可选但不是必须的，清洗后不影响染色。 d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。（2）对于活细胞或组织 a. 加入适量 Hoechst 33258 工作液，充分覆盖待染色的样品，通常对于六孔板每孔需加入 1 mL 的染色液，对于 96 孔板每孔需加入 100 μL 的染色液。 b. 室温避光孵育 10-30 min。 c. 弃染色液，用 PBS 洗涤 2-3 次后添加 50 μL PBS 进行显微拍照。注：清洗步骤可选但不是必须的，清洗后不影响染色。

注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
2. 相较于染色细菌，DAPI染料对哺乳动物细胞染色更加灵敏，染色死活细菌时推荐在PBS或150 mM NaCl中溶解为终浓度10 μg/mL的染色液，室温染色30 min。通常对于死细胞的染色要比活细胞染色亮度高。
3. 用于细胞核染色时，推荐DAPI工作浓度为0.5-10 μg/mL。
4. DAPI对人体有害，请穿实验服并戴一次性手套操作，注意适当防护。
5. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓淬灭。

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