产品名称：DiD（细胞膜红色荧光探针）

产品规格：10 mg

储存条件：-20℃避光保存，有效期见外包装。

产品介绍：DiD染料是亲脂性荧光染料家族成员之一，它可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当DiD与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散， 浓度时可以使整个细胞膜染色。DiD（远红色荧光）可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne激光器激发，有着比DiI（一种常见的细胞荧光染料）更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。
DiD染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地进行质膜染色。
以每次使用100 μL染色工作液，染色工作液浓度5 μM计算，10 mg配置为工作液大概可以用19009次。

产品参数：

外观：可溶于乙醇、DMF和DMSO的深蓝色固体
Ex/Em (MeOH) = 644/663 nm
CAS号：362596-00-7
分子式：C67H103ClN2O3S
分子量：1052.1
分子结构图：

使用方法：

1. 染色液制备（1）配制储液：储液用无水 DMSO 或 EtOH 配制，浓度 1~5 mM。注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS 或 PBS）稀释储液，配制浓度为 1~5 μM 的工作液。注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始 浓度的摸索。 

2. 悬浮细胞染色（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1×106 /mL。（2）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞 培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。（3）孵育结束，1000~1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液，再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。（4）重复步骤（3）两次以上。 

3. 贴壁细胞染色（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表面保持湿润。（3）在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。（4）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞 培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2~3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育 5~10 min，然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。 

4. 结果检测样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。

注意事项：
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。 

2. DiD 染色固定的细胞或组织样品时，通常使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。 

3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。