产品名称：Calcein AM（钙黄绿素 AM）

产品规格：1 mg

储存条件：-20℃ 避光保存，有效期见外包装。

产品介绍：

Calcein AM 是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，它可以穿透细胞膜进入细胞，被细胞内的酯酶剪切形成 Calcein，从而被滞留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如 BCECF, AM 和 CFDA）相比，Calcein AM 的细胞毒性很低。Calcein 的激发和发射波长分别为 490 nm 和 515 nm。Calcein AM 仅对活细胞染色。可与 PI 联用，用于区别活细胞和死细胞。由于不同细胞系的 染色条件不同，我们建议根据实际情况确定 Calcein AM 的最适浓度。

产品参数

使用方法：

1. 用 DMSO 制备 1 mM 的 Calcein AM 溶液，并用 PBS 将其稀释制成 1~50 μM 的 Calcein AM 溶液。注：不同的细胞适用的Calcein AM浓度不同，2 μM的Calcein AM 适用的细胞有 NIH3T3、PtK2、HeLa、MDCK 等。 

2. 染色 HeLa 等贴壁细胞时，先用 Trypsin-EDTA 等消化细胞，制备成细胞悬液。 

3. 将细胞悬液离心 3 min (1000 rpm)。 

4. 去除上清液，加入 PBS 缓冲液，细胞数量调整至 105 - 106 /mL，再用移液器充分混匀。注：由于培养基中的血清等含有酯酶，会分解 Calcein AM，导致空白背景数值上升，所以需要离心数次，用 PBS 洗涤数次直到完全洗净。 

5. 在 200 μL 细胞悬液中加入 50 μL 稀释后的 Calcein AM 溶液，在 37℃下孵育 15 min。 

6. 在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。用 490 nm 激发波长，515 nm 发射波长滤光片的荧光显微镜观察细胞。

注：如果 Calcein AM 很难进入细胞，可以使用表面活性剂处理，如 Pluronic F127。 

注意事项：
1. Calcein AM 的酯键遇到湿气会分解，使用后请在-20℃下密闭冷冻保存，防止水分进入。 

2. Calcein AM 储备液稀释后请及时使用，尽量现配现用。

3. 本产品仅供科研。