产品名称：Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒

产品规格：10T/50T/100T

储存条件：4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。

产品介绍：

Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36 KD的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，可与磷脂酰丝氨酸（PS）选择性结合。磷脂酰丝氨酸（PS）主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，暴露在细胞外环境中。此时，使用荧光蛋白PE标记的 Annexin V, 即 Annexin V-PE，与外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）结合，就可用流式细胞仪直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。正常细胞不会被Annexin V-PE所染色，发生凋亡或坏死的细胞会被Annexin V-PE所染色。Annexin V-PE可以与部分非渗透性的细胞核染料（7-AAD/PI）等联合使用，区分处于不同凋亡时期的细胞。
本试剂盒中提供的RedNucleus II是一种远红光染料，属于蒽醌类化合物，不能透过活细胞和早期凋亡细胞完整的细胞膜，是非渗透性的，但是可以快速染色死亡和透化细胞中的细胞核/dsDNA。RedNucleus II是一种理想的碘化丙啶（PI）和7-AAD的替代物，与Annexin V-PE联用，无需补偿调节，具有更好的光谱特性：不受紫外线的激发，也不与PE/PE同系物重叠发射，故可以和FITC，PE及紫色荧光染料结合用于多色分析。与Annexin V-PE联用时，RedNucleus II被排除在活细胞和早期凋亡细胞外，而晚期凋亡细胞和死细胞则同时被Annexin V-PE和RedNucleus II结合染色呈现双阳性。
Annexin V-PE/RedNucleus II细胞凋亡检测试剂盒可用流式细胞仪及或其他荧光检测设备进行检测。

产品内容：

光谱特性
Annexin V-PE：Ex/Em=488/578 nm
RedNucleus II：Ex/Em=635/695 nm

注意事项：

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 为降低细胞凋亡进程，孵育过程可在冰上操作，但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI 摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 YF®647A-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA，EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，建议在 培养条件和培养基中恢复约30 min后染色，避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的 使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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