产品名称：细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒

产品规格：100T

储存条件：-20℃保存，其中 E 组分 X-Gal 溶液需避光保存。有效期见外包装。

产品介绍：

细胞衰老（Cell senescence）是指细胞在执行生命活动过程中，随着时间的推移，细胞增殖与分化能力和生理功能逐渐发生衰退的变化过程。通常情况下，机体会对衰老细胞进行清除，而未被清除的衰老细胞则可能会体内积累，引起低水平的炎-症，或进一步诱导临近组织衰退、癌-变等。细胞衰老的一些特征包括细胞形态改变、细胞周期停滞、衰老相关分泌表型、大分子损伤及代谢紊乱等。目前，鉴别细胞衰老特异性 的标志为衰老相关 β-半乳糖苷酶 (senescence associated β galactosidase, SA-β-Gal)，随着细胞的衰老其会逐渐累积，而在衰老前细胞、静止细胞和终末分化细胞中则是缺乏的。本试剂盒利用衰老细胞中的β-Gal在pH为6.0时可以催化5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷（5-bromo-4-chloro-3- indolyl-β-D-galactopyranoside, X-gal)水解生成蓝色物质，从而可在光学显微镜下观察到细胞或组织的衰老状况。以贴壁细胞（6孔板）举例，每孔1 mL染色工作液，100 mL可用于100个孔的染色。

使用方法

1. 贴壁细胞染色（6 孔板）

（1）细胞铺板过夜，待细胞生长至 60% - 80%汇合度时可以进行实验。

（2）去除细胞培养液，用 PBS 清洗 1 次。

（3）加入 1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定 10~15 min。

（4）去除 β-半乳糖苷酶染色固定液，用 PBS 清洗 3 次，每次 2-3 min。

（5）根据表1配置染色工作液，具体染色工作液总量请根据样本类型、样本数等进行计算。

（6）去除PBS，每孔加入1 mL染色工作液，37℃无CO2培养箱孵育过夜。注：为防止液体蒸发影响染色结果，建议在边缘孔中加入水或PBS，减少“边缘效应”，同时用封口膜或保鲜膜封住孔板。

（7）普通光学显微镜下进行观察计数。

（8）可选：去除染色工作液，加入 2 mL PBS，4℃可保存数天。

2. 悬浮细胞染色

（1）收集细胞，2500 ×g 离心 10 min，用 PBS 清洗 1 次。

（2）加入 1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定 10-15 min。注：可将细胞放置摇床上缓慢摇动，以避免细胞结团。

（3）2500 ×g 离心 10 min，去除 β-半乳糖苷酶染色固定液，用 PBS 清洗 3 次，每次 1-3 min。

（4）根据表 1 配置染色工作液，具体染色工作液总量请根据样本类型、样本数等进行计算。

（5）2500 ×g 离心 10 min，去除 PBS。每管加入 0.5-1 mL 染色工作液，37℃孵育过夜。

（6）吸取部分细胞滴加到载玻片上或 6 孔板内，普通光学显微镜下进行观察计数。

（7）可选：去除染色工作液，再加入 1 mL PBS，4℃可保存数天。

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 细胞衰老 β-半乳糖苷酶检测依赖于特定的 pH 条件，而 CO2 培养箱中较高浓度的 CO2会影响染色工作液的 pH 值，因此， 37℃孵育不能在 CO2培养箱中进行。

3. X-Gal溶液在 -20℃或4℃保存会冻结，室温或37℃水浴2-5 min并适当摇动即可完全融解，若需要分装该溶液或配置染色工作液，需要使用聚丙烯 (PP) 或玻璃材质的耗材，不要使用聚苯乙烯（PS）耗材，如细胞培养板、血清移液管等。

4. β-半乳糖苷酶染色液B的管底可能存在少量沉淀，属正常现象，请充分震荡涡旋，待全部溶解后再进行染色实验。

5. 如需染色切片样本，请参考相关文献并进行预实验摸索方案。

6. β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的毒性和腐蚀性，操作时请穿实验服并戴一次性口罩和手套，避免直接接触人体或吸入体内。

7. 本产品仅供科研。