【产品名称】
商品名称:对虾急性肝胰腺坏死综合症(AHPNS)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
【包装规格】25T/盒、50T/盒
南美白对虾的“偷死病”学术上称为EMS(对虾早期死亡综合症)或“急性肝胰腺坏死症”,对虾会出现体色呈白浊并微红,肝胰腺肿大,质地松软,颜色淡白或淡黄色,继而萎缩等症/状,
该病的肝胰腺坏死症/状与对虾其它早期死亡现症/状存在明显不同,联合国粮农组织和亚太地区水产养殖联盟(NACA)将之命名为急性肝胰腺坏死综合症(AHPNS)。
这种病主要是因为感染了一种具有毒性基因PirA和PirB的弧菌,以副溶血弧菌多见,也见有哈维氏弧菌以及其他少数种类的弧菌。该病是国内外近两年来南美白对虾的一种多发/病。凡纳滨对虾发生AHPNS后体色发白,虾壳变软,活力减弱,行动迟缓;肝胰腺颜色暗淡苍白或糜烂发红,部分对虾的肝胰腺明显萎缩或者异常肥大,发生坏死,空肠空胃。
【试剂组成】
包装规格 25T/盒 50T/盒
AHPNS 反应液 500μL×1 管 500μL×2 管
酶液 25μL×1 管 50μL×1 管
AHPNS 阳性质控品 50μL ×1 管 50μL ×1 管
阴性质控品 250μL ×1 管 250μL ×1 管
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
取有损伤的活鱼或濒死鱼的皮肤和肌肉(<1cm3)。
【保存和运输】
采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h;若需长期保存,应放置-70℃以下保存,冻融不超过 3 次。
【使用方法】
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行;
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
3. 反应液应避光保存;
4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
7. 实验完毕后用 10%次氯/酸或 75%酒/精或紫外灯处理工作台和移液器;
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。