【产品名称】

商品名称：对虾桃拉病毒(TSV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

动物病害检测系列可针对动物组织、饲料、粪便等样品中病原的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于对虾桃拉综合症病毒（TSV）RNA的检测。检出限为 101copies/μL 基因组 RNA。

【包装规格】50T/盒
【试剂组成】

试剂	含量
A-TSV-P	20μL × 8管× 6排
NG-P	100μL × 2支
PG-TSV-P	100μL × 1支

【储存条件及有效期】
请于-20℃条件下保存，有效期15个月
【适用仪器】
Gentier 32R、Gentier 48E/48R、Gentier mini、CFX 96等实时荧光 PCR 仪。

【自备耗材和仪器】
①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属   浴；⑥均质机、搅拌机或研钵等研磨器具；⑦电子天平。

【注意事项】
1. 本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1） 区：样本制备区。
2） 区：模板添加区。
3） 第三区：扩增及产物分析区。
★ 分区之间 进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3. 严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4. 反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心
30秒。
5. 反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6. 不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
【样品处理】
参照《SN/T1151.1-2011 对虾桃拉综合征检疫技术规范》或其他标准处理样品，制备的样本保存待用。详细步骤请按照标准操作。
【实验操作】
1. 模板制备（样本制备区）
建议使用水生动物病原体基因组DNA/RNA提取试剂盒（FAST）等商品化试剂盒，具体过程详见产品说明书。
2. 添加模板（模板添加区，放置于冰盒上进行）
剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管，放置在室温待解冻后，离心 30 秒后打开管盖，向每管反应液中分别加入 5μL 模板，顺序为 NG、待测样品模板、PG-TSV-P。盖好管盖后，涡旋混匀 30s，离心 1min，立即进行 PCR 扩增反应。
3. 扩增反应（扩增及产物分析区）
使用荧光定量 PCR 仪，荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 NONE。按下列条件设置扩增反应：

PCR 循环PCR 循环			荧光收集位点
50℃	5分钟	1 个循环	—
95℃	5分钟	1 个循环	—
95℃	15 秒	45 个循环	—
60℃	30 秒		※

其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
4. 基线和阈值设定
基线调整取 3-15 个循环的荧光信号，阈值线应超过阴性对照扩增曲线的 点。
【 结果判定】
测试样品检测 Ct 值≥45 或无 Ct 值，曲线为直线或轻微斜线，无“S”型扩增曲线，可判定样品不含有对虾桃拉综合症病毒（TSV）或含量低于检出限；
测试样品检测 Ct 值≤40，曲线呈“S”型扩增曲线，可判定样品含有对虾桃拉综合症病毒（TSV）；
测试样品检测 Ct 值在 40～45 之间，应调整模板浓度，重做实时荧光 PCR。再次扩增后的样品检测 Ct 值＜45， 则可判定样品含有对虾桃拉综合症病毒（TSV）；再次扩增后的样品检测 Ct 值≥45，则可判定该样品不含有对虾桃拉综合症病毒（TSV）或含量低于检出限。

★ NG 反应为平滑直线，PG 反应为“S”型扩增曲线，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。