【产品名称】
商品名称：结核分枝杆菌复合群（MTBC）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

【包装规格】25T/盒、50T/盒

【相关信息】

结核分枝杆菌复合群是指由结核分枝杆菌、田鼠结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌等生物学特性比较接近的结核杆菌，所组成的一个群体。部分结核分枝杆菌复合群中的结核杆菌具有人致病性，部分没有人致病性。

结核分枝杆菌复合群中的结核分枝杆菌是导致人类结/核/病的主要结核杆菌，对人类的影响较大。另外，牛结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌也具有一定的人致病性，可以感染人体。此外，田鼠结核分枝杆菌通常对于人体没有致病性，一般不会导致人体患病。

【检验原理】
本试剂盒用一对结核分枝杆菌复合群（MTBC）特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对结核分枝杆菌复合群（MTBC）的 RNA 进行体外扩增检测，用于临/床/上对可疑感染病料的病原学诊断。

【试剂组成】

包装规格	25T/盒	50T/盒
MTBC 反应液	500μL×1 管	500μL×2 管
酶液	25μL×1	50μL×1 管
MTBC 阳性质控品	50μL ×1 管	250μL ×1 管
阴性质控品	250μL ×1 管	250μL ×1 管

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀动物，无菌采集肺病/变部位或病/变/非病/变部位交界处的样品；活动物   灭菌棉拭子沾取气管分泌物，放入无菌试管中。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输， 严禁反复冻融。

【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；气管分泌物取 100μL 提取。

1.2 DNA 提取
推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
试剂 MTBC 反应液 酶液
用量（样本数为 N） 20μL 1μL
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道
（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号
1 1 cycle 95℃ 10min 否
2 40 cycles 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道 35 阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
6. 质控标准
阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
? 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
? 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
? 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
? 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
? 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
? 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定   量检测不准确的结果；
? 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症/状以及其他检测手段。

【注意事项】
? 所有操作严格按照说明书进行；
? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
? 反应液应避光保存；
? 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
? 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
? 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通   则》进行处理。