人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)含量。

实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)水平。用纯化的人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)，再与 HRP 标记的皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过 洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)呈正相关。用酶/标/仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)浓度。

试剂盒组成

人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA试剂盒自备材料
1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。

人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA试剂盒试剂的准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA试剂盒操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生/物/素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA试剂盒操作注意事项
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。