【产品名称】
通用名称： 猪圆环病毒1型(PCV-1)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
Name ：Porcine Circovirus type I Detection Kit (PCR Method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
猪圆环病是由猪圆环病毒（Porcine Circovirus）引起猪的一种传/染/性、先天性颤/抖和断奶仔猪多系统功能障碍性疾病。该病毒具有 PCV1 和PCV2 两种血清型， PCV1 无致病性[1]。PCV1 具有很强的免疫抑/制/作/用，临/床/上常表现为多病原混合感染[2]，PCV1 与断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）密切相关，还可引起猪皮/炎与肾/炎综合征、呼/吸/道综合征和 A2 型先天性震/颤等疾病，给养猪业造成巨大经济损失[3]。因此PCV1 感染早期诊断尤为重要。
本试剂盒适用于检测从肺、淋巴结组织、全血等标本中分离出的猪圆环病毒 1 型 DNA，用于猪圆环病毒 1 型的辅助诊断。

【检验原理】
本试剂盒用一对猪圆环病毒 1 型特异性引物，对猪圆环病毒 1 型 DNA 进行体外扩增检测，用于临/床/上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】
名 称 规 格
PCV-1 反应液 550μL×2 管
PCV-1 阳性质控品 50μL ×1 管
阴性质控品 250μL ×1 管
1） 不同批号试剂不能混用。
2） 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融不超过 5 次，有效期 12 个月。

【所需仪器】
PCR 仪、电/泳/仪、紫外凝胶成像仪等
【标本采集】
病死或扑杀的猪，取肺、淋巴结等组织；待检活猪，用注射器取血 5mL

【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标
本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手/术/剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中； 全血样本：待血凝固后，取血清放于离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清 100 μL 于灭菌离心管中

1.2 DNA 提取
采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请
按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
试剂 PCV-1 反应液
用量（样本数为 N） 21μL

3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于 PCR 仪反应槽内；
4.2 推荐循环参数设置：
步骤 循环数 温度 时间
1 1 cycle 94℃ 2min

2
35 cycles 94℃ 30sec
58℃ 30sec
72℃ 60 sec
反应体系为 25μL；
5. 电泳检测
1) 2%琼/脂糖凝胶配制：稀释 50×TAE 缓冲液至 1×TAE (取 20mL 50×TAE 缓冲液， 加 980mL 双蒸水至 1L)，称 4g 琼/脂糖放于 500mL 锥形瓶中，1×TAE 缓冲液 200 mL，置入微波炉中加热熔解(避免加热沸腾溶液外溢)，再加入 10μL 染料充分混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼/脂糖凝胶，待凝固后使用；

2) 电泳：在电泳槽中加入 1×TAE 缓冲液，使液面刚刚没过凝胶。用移液器取 10μ L PCR 扩增产物于琼/脂糖凝胶孔中。加样后，以 5V/cm 电压，电泳 20-30min（每次电泳时，每隔 10min 观察一次。当加样缓冲液中溴/酚蓝电泳过半至凝胶下 2/5 处时，可停止电泳）。电泳后，紫外灯下观察结果。

6. 结果判定

阳性质控品出现 1154 bp 条带，阴性质控品不出现条带或只出现片段较小的引物二聚体条带，实验结果成立。被检样品出现 1154 bp 条带，判断为阳性，否则为阴性。