马梨形虫病（Piroplasmosis）核酸检测试剂盒（双重荧光 PCR 法）-优利科（上海）生命科学有限公司

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马梨形虫病（Piroplasmosis）核酸检测试剂盒（双重荧光 PCR 法）

品牌：YLKbio

产地：国产/进口

型号：50T/盒

货号：YLK-PCR0255

价格： ￥2800/盒
发布日期： 2024-05-15
更新日期： 2025-08-22

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产地	国产/进口
品牌	YLKbio
货号	YLK-PCR0255
用途	科研
包装规格	50T/盒
是否进口	否

【产品名称】
通用名称：马梨形虫病（Piroplasmosis）核酸检测试剂盒（双重荧光 PCR 法）
Name：Diagnostic Kit for Piroplasmosis DNA(Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于马属动物（马、驴、骡和斑马）的马梨形虫病辅助诊断，其检测结果仅供参考。
【检验原理】
马梨形虫病是由马泰勒虫和驽巴贝斯虫寄生于马属动物（马、驴、骡和斑马）的红细胞内所引起的蜱传性血液原虫病。本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，对马泰勒虫 18S 基因和驽巴贝斯虫 BC48 基因分别设计一对特异性引物和一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对马梨形虫的核酸进行体外扩增检测，用于临/床/上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
包装规格 50T/盒
Piroplasmosis 反应液 500μL×2 管
酶液 50μL×1 管
Piroplasmosis 阳性质控品 50μL ×1 管
阴性质控品 250μL ×1 管
说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 9 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀动物的淋巴结或脾/脏 2g；待检活动物，抽取全血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手/术/剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；咽拭子样品直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 核酸提取
推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满
10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
试剂 Piroplasmosis 反应液酶液
用量（样本数为 N） 20μL 1μL
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择：检测通道（Reporter Dye） FAM、VIC，淬灭通道（Quencher Dye）NONE，请勿选择 ROX
参比荧光。
4.3 推荐循环参数设置：

步骤循环数温度时间收集荧光信号
1 1 cycle 95℃ 10min 否
2 40 cycles 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是

5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断
FAM 通道为马泰勒虫检测结果，VIC 通道为驽巴贝斯虫检测结果。阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道 35<Ct 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；
阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
6. 质控标准
阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32；以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症/状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯/酸或 75%酒/精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。