【产品名称】
商品名称：乙型流/感病毒（IBV）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
Name ：Diagnostic Kit for Influenza B virus RNA (Real-Time RT-PCR Method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于检测的咽拭子、血清和痰等标本中乙型流/感病毒 RNA，适用于乙型流/感病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
【检验原理】
本试剂盒用一对乙型流/感病毒特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对乙型流/感病毒 RNA 进行体外扩增检测，用于临/床/上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
包装规格 50T/盒
IBV 反应液 500μL×2 管
酶液 50μL×1 管
IBV 阳性质控品 50μL ×1 管
阴性质控品 250μL ×1 管
注：1）不同批号试剂不能混用；
2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
咽拭子：应使用专用采样拭子，适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将拭子放入标本采集管中，旋紧管盖并密封，以防干燥。全血：疑似感染者的静/脉血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，8000rpm 离心 2min，取适量上清液于 1.5mL 灭菌离心管中。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输， 严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
取适量样本于 1.5mL 灭菌离心管中，按 RNA 提取试剂盒说明书进行提取。
1.2 RNA 提取
推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的 RNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操
作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
试剂 IBV 反应液 酶液
用量 20μL 1μL
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择：
检测通道（ReporterDye）FAM，淬灭通道（QuencherDye）NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。

4.3 推荐循环参数设置：
步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号
1 1 cycle 42℃ 20min 否
2 1 cycle 95℃ 10min 否
3 40 cycles 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道 35
阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
6. 质控标准
阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症/状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯/酸或 75%酒/精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。